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用 PCR 来制备编码随机肽的双链 DNA 文库实验

实验分类:

PCR 技术

最新修订时间:

简介

使用合成的寡核苷酸构建文库时,PCR 有两个重要的作用。第一,用与特定侧翼序列退火的引物来扩增文库,仅用少量的不同模板,就可以得到大量的 PCR 产物。第二,若要产生文库 DNA 的复杂互补链,PCR 合成法是有效的方法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。

来源:丁香实验

操作方法

用 PCR 来制备编码随机肽的双链 DNA 文库实验

一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 灭菌双蒸水(ddH20) 10 mmol/LTris-HCl,pH8.0 2. 酶和酶缓冲液 限制性内切酶和缓冲液(见第 9 步) 10XVent 缓冲液 VentDNA 聚合酶 3. 核酸和寡核苷酸 生物素标记的 PCR 引物,长度至少 15bp,5'末端进行了生物素修饰(见图 26-1)。 编码 12 个氨基酸的 NNK 库。库的设计

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