相对 RT-PCR: 引物与竞争子比例的决定实验

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

这个方案的目的是要选择一个 18SrRNA 引物和竞争子之间的恰当比例，可以模仿目的转录本的表达量。对于大多数转录本来说，一般比例为 3:7。对于模板比较稀少的，采用2:8 或 1:9 可能更恰当。准备的 PCR 反应混合物应比 5 个反应多 10%。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

来源：丁香实验

操作方法

相对 RT-PCR: 引物与竞争子比例的决定实验

一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶的双蒸水 10XRT-PCR 缓冲液（100 mmol/LTris-HCl、pH8.3，500 mmol/LKC1，15 mmol/LMgCl2) 2. 酶和酶缓冲液 Taq DNA 聚合酶（5U/ul) 3. 核酸和寡核苷酸 cDNA(来自方案 1) dNTP 混合物（10 mmol/L, 包含所有四种 dNTP) 基因特异的