核酸分子固相杂交实验
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简介
原理
应用
来源：《医学分子生物学实验技术》药立波第3版第6章
操作方法
DNA 的印迹杂交，又称 Southern 印迹杂交（Southern blotting），是指将通过凝胶电泳分离的DNA片段转移到特定的固相支持物上，在转移过程中 DNA 分子保持其原来的相对位置不变，然后采用标记的核酸探针与结合于固相支持物上的 DNA 分子进行杂交的技术。由于探针与待测核酸片段中的互补序列形成杂交分子，探针分子显示的位置及量的多少，将反映出待测核酸分子中是否存在相应的基因以及
膜印记杂交法（固相杂交-Northern 印迹杂交法）Northern 印迹杂交（Northern blotting）是通过凝胶电泳使完全变性的 RNA 按大小分离，然后利用印迹技术将 RNA 分子转移到固相支持物上，固定后再采用特异性的探针进行杂交来鉴定其中特定 mRNA 分子的量与大小。Northern 印迹杂交除了在样品的制备与凝胶电泳分离样品及胶的处理步骤与 Southern 印迹杂交不同外，其他步骤与 Southern 印迹杂交基本一致。采
膜印记杂交法（固相杂交-斑点/狭缝印迹杂交法）斑点印迹杂交法（dot blotting）是将 RNA 或 DNA 变性后直接点样于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，再采用特定的探针进行杂交；狭缝印记杂交（slot blotting）采用狭缝点样器加样后杂交，二者的区别主要是点样的形状不同。原理斑点/狭缝印迹杂交法的基本原理是将 RNA 或 DNA 变性后直接点样于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，再采用特定的探针进行杂交。用途斑点/狭缝印迹杂交法常用于基因表达的
细胞原位杂交法（固相杂交-菌落/噬菌斑原位杂交）菌落/噬菌斑原位杂交是一种在硝酸纤维素滤膜上原位裂解细菌菌落并将释放出来的 DNA 非共价结合于滤膜的方法。结合于滤膜上的 DNA 再与相应的放射性标记核酸探针杂交，根据杂交结果筛选含有目的 DNA 序列质粒的细菌菌落。菌落的原位杂交技术主要用于基因克隆以及基因文库的筛选，以期从大量细菌克隆中分离含有目的基因片段的阳性克隆。原理核酸原位杂交（nucleic acid hybridization i
细胞原位杂交法（固相杂交-荧光原位杂交法）荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）中的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记。用核素标记的放射性探针的优势在于对制备样品的要求不高，可以通过延长曝光时间加强信号强度；缺点是探针不稳定、自显影时间长、放射线的散射使得空间分辨率不高及核素操作较繁琐等。采用荧光标记系统即FISH技术可以克服以上不足。FISH 技术作为非放射性检测体系
