基因置换实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

基因置换是酵母研究中最有效和最重要的技术之一。这种技术能使一个在染色体正常位置的基因与其离体条件下构建的等位基因进行置换，使置换前后的菌株仅仅在这个特殊的等位基因上存在遗传差异。利用这种方法可以分析在基因克隆中由无效突变 (null mutationr) 或其他任何类型突变所引起的表型变化。无论在理论上或在实践中，一个被克隆的酵母基因均有可能发生突变，然后通过重组进入基因组，从而精确的置换野生型等位基因。

来源：丁香实验

操作方法

—步基因破坏法

两步基因置换法

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质粒改组

第 1 天将菌株 7-2 在 YPD 平板上划线，30°C 培养。第 3 天挑一个丰满的菌株 7_2 菌落，接种到 5 mlYPD 培养液，30°C 下培养过夜。第 4 天使用血球计数板（附录 G，用标准血球计数板进行酵母细胞计数）测定 5 ml 菌株 7-2 培养物的细胞密度。用 50 mlYPD 培养液将细胞稀释至 5X106 个/ml，置 30°C 培养细胞到两次分裂（约

构建融合蛋白

YPD 平板第 1 天将菌株 7-3 在 YPD 平板上划单克隆，30°C 下培养两天。第 3 天挑取单克隆，在 5 mlYPD 液体培养基中培养，30°C 过夜。第 4 天使用血球计数板测定细胞密度（附录 G)。将细胞稀释至 5X106 个/ml，按照「技术和方案 1，酵母的高效转化」进行高效转化。两个 DNA 样品将被用作转化。