近几年来, DNA 微阵列已经被公认是分子生物学研究的一种标准方法。特别是在生物医学研究方面,常用物种的微阵列一面世就得到广泛应用。但是对于非模式生物来说 ,微阵列的应用尚未得到充分开展,而这些物种往往表现出一些很有趣的生理表型。对大多数比较生物学的研究者来说,制备一个新物种的 D N A 阵列或微阵列是一项成本高、工作量大的实验,这也是阻碍这方面应用的主要原因。异源阵列杂交的方法可作为另一个选择,即用一个物种的阵列筛选另一个物种的应激诱导基因。本章主要对异源DN A 阵列杂交有关文献进行综述,并探讨进行非模式生物异源微阵列分析时应考虑的因素,同时也对其他内容进行了讨论,包括针对交叉反应的方法学的改进(比如杂交条件、清洗的严谨度),可能出现的假阳性和假阴性结果,以及下游基因分析方法和阵列数据的验证。本章示例中讨论的与人的微阵列进行异源杂交的物种在系统发育学上跨度
较大,从松鼠到青蛙到蜗牛都包括在里面。尽管像所有的新技术一样,能够掌握应用异种杂交技术的人还不多,但由于最初的障碍已经被克服,它的发展前景十分广阔。
作者:马丁,本实验来自「环境基因组学实验指南」
比较分子生理基因组学 —cDNA阵列的异种杂交实验
一、材料
这里用到的所有化学试剂都为分子生物学等级,或者用它们最高纯度的等效物。所有的塑料和玻璃制品,包括瓶子和移液器吸头都要高压灭菌,在核酸实验操作过程中必须始终戴手套。 cDNA A T L A S阵列从Clontech购得。人 19K cDNA 阵列从Ontario 癌症研究所购得。
1 总 RNA 的提取
(1)焦 碳 酸 二 乙 酯(DEPC) (Sig