体外转录合成单链 RNA 探针

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

制备特异性的单链 RNA 探针不仅比 DNA 探针更容易，在杂交反应中一般也比具相同比活性的 DNA 探针产生更强的信号，这可能是由于含有 RNA 的杂合链固有的更高稳定性的缘故（Casey and Davidson 1977)。虽然 DNA 探针仍普遍地应用于 Northern 和 Southern 杂交，但放射性标记的 RNA 目前是首选探针。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

体外转录合成单链RNA探针

一、材料 1. 缓冲液与溶液乙酸铵（10 mol/L）牛血清白蛋白（2 mg/ml，组分 V，Sigma 公司） DTT ( 1 mol/L) 乙醇酚：氯仿（1:1，V/V) 胎盘 RNA 酶抑制剂（20 单位/μl）醋酸钠（3 mol/L，pH 5.2) 10X 转录缓冲液（400 mmol/L Tris-Cl ( 37℃ 下 pH 7.5)，60 mmol/L MgC