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体外转录合成单链 RNA 探针

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

制备特异性的单链 RNA 探针不仅比 DNA 探针更容易,在杂交反应中一般也比具相同比活性的 DNA 探针产生更强的信号,这可能是由于含有 RNA 的杂合链固有的更高稳定性的缘故(Casey and Davidson 1977)。虽然 DNA 探针仍普遍地应用于 Northern 和 Southern 杂交,但放射性标记的 RNA 目前是首选探针。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源:丁香实验

操作方法

体外转录合成单链RNA探针

一、材料 1. 缓冲液与溶液 乙酸铵(10 mol/L) 牛血清白蛋白(2 mg/ml,组分 V,Sigma 公司) DTT ( 1 mol/L) 乙醇 酚:氯仿(1:1,V/V) 胎盘 RNA 酶抑制剂(20 单位/μl) 醋酸钠(3 mol/L,pH 5.2) 10X 转录缓冲液(400 mmol/L Tris-Cl ( 37℃ 下 pH 7.5),60 mmol/L MgC

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