克隆化的 PCR 产物连入 T 载体

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

由 Taq DNA 聚合酶 PCR 扩增产生的带 3' 突出端为 A 碱基的 DNA 片段能高效地克隆至 T 载体上，这种 T 载体有与 A 碱基互补的未配对 3' T 碱基（Holton and Graham 1991; Marchuk et al. 1991)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

克隆化的PCR产物连入T载体

一、材料 1. 酶与缓冲液噬菌体 T4 DNA 连接酶 2. 凝胶琼脂糖凝胶 3. 核苷酸与寡核苷酸 PCR 扩增的靶 DNA ( 25 μg/ml) 4. 载体 T 载体 5. 特殊设备预设水温在 14℃ 的水浴箱二、方法 1. 在一只微量离心管内，依次加入下列连接混合液： 25 μg/ml 扩增靶序列 DNA 1 μl T 质粒

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