四环素作为可诱导基因表达的调控物实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

下面的方案分成 3 个阶段：用 pTet-tTAk 稳定转染成纤维细胞，稳定转染可诱导表达 tTA 的 NIH-3T3 细胞，分析转染细胞中的蛋白表达。稳定转染细胞系表达反式激活因子和靶基因分为两个阶段。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

四环素作为可诱导基因表达的调控物实验

阶段 1:pTet-tTAK 稳定转染成纤维细胞材料缓冲液和溶液贮存液稀释到适当浓度。 CaCl2(2mol/L) 溶液过滤除菌，然后以毎份 5 ml 分装，贮存在-20°C。小牛血清（10%) 氯喹（10 mg/ml) 可选，请见步骤 7。氯喹溶于水，溶液过滤除然后贮存在-20°C 。 10 mg/ml 氯喹相当于 19 mmol/L。请见第 16 章信息栏的二磷酸氯喹部分。