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用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

本方案主要描述了筛选噬菌体 M13 重组克隆,而一种选择方案是筛选含噬菌粒的细菌克隆。最后也介绍了用 PCR 检测突变体的方法。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源:丁香实验

操作方法

用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验

材料 缓冲液和溶液 各种贮存液,缓冲液的成分及相关试剂请参见附录1 将贮存液稀释至所需的浓度。 甲酸铵(0.2mol/L) 寡核苷酸杂交溶液 6XSSC 5XDenhardt's溶液 106至107dpm/ml放射性标记的寡核苷酸 寡核苷酸预杂交液 6xSSC 5xDenhardt's溶液 0.1%(m/V)SDS 6XSSC 6XSSC应在所需要的温度下顸热,请见步骤 11,12

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