反转录病毒产毒细胞系建立实验

1. 在转染前1天，在10 cm 培养皿中接种包装细胞，接种密度大约相当于10%~20%片的细胞数。 2. 将10 μg 含有药物抗性基因的反转录病毒质粒DNA加入0.5 ml HeBS。再加入32 μl 2 mol/l CaCl2并同时轻轻摇晃。用手指轻弹试管外壁约 30 s，然后在室温下温育45 min，直到形成细小的淡蓝色沉淀。 3. 移去包装细胞的培养液，吸取HeBS-DN

1. 感染的前1天按1：10至1：20将靶细胞NIH 3T3分传于6 cm 培养皿中。 2. 进行感染的当天，移去靶细胞的培养液，加入含有病毒原液的培养液。用1~2 ml 含 有0.01 μl~0.1 ml 病毒原液的培养液感染6 cm 培养中的细胞，或3~5 ml 感染10 cm 培养皿中的细胞。对于鼠源性的或禽源性的E亚群，加800 μg/ml的polybrene至终浓度8 μg

1. 弃培荞上清并加固定液，室温下，在通风橱中与2%低聚甲醛共育60 min，或与0.05%戊二醛共育5~15 min。 2. 根据实验室化学物弃置规程弃去固定液，室温下用PBS充分洗涤细胞3次，第1次和第3次是快速洗涤，第2次洗涤时，可保留PBS于细胞上10 min。 3. 加入能覆盖细胞的最小量Xgal溶液，37℃温育1 h 或过夜，阳性细胞被染蓝。