哺乳动物细胞基因稳定转染的实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

分析基因的功能常需要形成含有稳定整合了该基因的哺乳动物细胞系。在转染中大约有1/10⁴细胞将稳定整合外源因而可用一显性（正向）选择标记来分离稳定的转化细胞。用可高效转染的细胞系来确保转染成功。另外，应包括合适的对照以确定目的基因无细胞毒性。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1. 确定所要转染的细抱系能呈独立集落生长。对于贴壁细胞，在10 cm 组织培养培养皿中接种约100个细胞，培养10~12天，毎4天换液1次。亚甲蓝染色后对成活的细胞集落进行计数。 2. 确定母代细胞的选择条件：将一培养皿上生长汇片的细胞按不小于1：15的比例分传于含有不同药物浓度的培养液中。培养10天。用合适的选择培养液每4天换液1次，并检查活细胞。 3. 确定转染母代细胞