脂质体介导的真核细胞转染实验

1. 按5×105细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞，在37℃ 5%CO2培养箱中 培养过夜，直至细胞80%汇片。（如果用100 mm 培养皿代替六孔扳，则培养细胞至80%汇片，将所有数量扩大8倍） 2. 在聚苯乙烯管中配制DNA/脂质体复合物如下：稀释质粒DNA至1 ml DMEM-SF中，在旋涡混合器上振荡1 s 然后加入脂质体悬液、再次旋起混匀。在室温下温育5~ 10

1. 接种细胞（见“脂质体介导短暂表达”步骤1）长至50%汇片。 2. 制备DNA/脂质体混合物，转染细胞（见“脂质体介导短暂表达”步骤2和3）。 3. 每孔细胞加入1 ml DMEM-20完全培养液，37℃ 培养箱培养48 h。 4. 吸去DMEM，稀释细胞分传于选择培养液中。将细胞培养适当时间以选择真正被转染的细胞克隆。

一、腺苷脱氨酶（ADA） 1. 选择条件：培养液中加10 μg/ml 胸腺嘧啶脱氧核苷，15 μg/ml 次黄嘌呤，4 μmol/l 腺嘌呤-9-β-D-呋喃木糖苷（Xyl-A），及0.01~0.3 μmol/l 2‘-脱氧助间型霉索（dCF）。胎牛血清中含有ADA可解除培养液的毒性，所以在用前才加入培养液中。 2. 选择原理：Xyl-A可转化成Xyl-ATP并掺入核酸中