电穿孔转染真核细胞实验

1. 在完全培养液中培养特转染细胞至对数生长晚期，4℃ 640 g 离心5 min，收集细胞。 2. 将细胞沉淀用其半量体积的预冷电穿孔缓冲液重悬洗涤，4℃ 640 g 离心5 min。 3. 对于稳定转染，将细胞以1×107/ml的密度重悬于0℃的电穿孔缓冲液中。对于短暂表达，可用更高密度的细胞。 4. 在冰上放置所需数量的电穿孔用的电击池，毎池中栘入0.

1. 将小心切成5 mm 的条状无菌植物材料8 ml 原生质体溶液中温育，置于30℃旋转摇床上3~6 h。从中获取原生质体细胞。 2. 经80 μm的尼龙筛网滤过除去沉渣，用4 ml 电穿孔缓冲液淋洗筛网。将原生质体细胞并入一个无菌的15 ml 锥形离心管中。 3. 300 g离心5 min，弃上清。加5 ml 植物电穿孔缓冲液，重复洗涤步骤。按1.5×106~2×106细胞/ml