使用合成核苷酸作探针实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

基因探针（probe）又称“寡核苷酸探针”，简称“探针”，就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。

来源：丁香实验

操作方法

在氯化钠/柠檬酸钠中杂交

1. 制备双份的转印细菌菌落或噬斑的硝酸纤维素滤膜（处理和干烤过）。 2. 在室温下用3× SDS / 0.1%SDS溶液500 ml 洗膜3~5次。 3. 然后在65℃洗膜至少1.5 h 以上直至过夜。 4. 在预杂交液中37℃预杂交1 h。 5. 在装有20 ml 以上的SSC杂交液的可封口的杂交袋中可移入多达20张的滤膜。 6. 在毎个杂交袋中每毫

在绿化四甲胺中（TMAC）杂交

1. 按“在氯化钠/柠檬酸钠中杂交”介绍的方法处理已影印细菌菌落的滤膜。 2. 按下列方法制备带扩增噬斑的滤膜（1）从文库中以渐减密度〔15 000~8 000噬斑 / 150 mm 平板）的方式将噬菌体铺在琼脂糖平板上。（2）37 ℃培养至长出可见的噬斑。（3）将噬斑影印到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜后，滤膜移至预热的LB琼脂糖平板上，37℃培养5~12 h（转印后