简介
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的。
来源:丁香实验
操作方法
1. 切下组织并立即剪成小块,置于液氮中冻结。 2. 将200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵和研杵研碎,或用锤子将其捣为细粉末,每100 mg 组织用1. 2 ml 消化缓冲液悬浮。 3. 500 g 离心细胞5 min,弃上请。贴壁生长细胞先用胰酶消化。 4. 细胞用1~10 ml 冰冷的PBS重悬,500 g 离心5 min,弃上清,重复1次。 5. 用1体积 的消化缓冲液重悬细