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细胞融合后为什么杂交瘤细胞无效价?

相关实验:单克隆抗体技术

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dxy_qe35p7xe

小鼠融合前效价为256000(OD450为0.238,阴性对照为0.07),融合之后13天出现较大细胞团(大概有五十几个),然后取100ul上清作为一抗测效价,但是均无效价,这大概会有哪些原因导致?

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4 个回答

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sswei

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杂交瘤生成首先取决于宿主独特的免疫反应。因此,用于免疫的抗原需要引起强烈的体液反应,或者换句话说,它们需要具有免疫原性。并非所有抗原物质(蛋白质、小分子、脂质、碳水化合物、肽)都具有免疫原性。这种能力取决于抗原来源的生物体和用于产生杂交瘤的宿主生物体之间共有的同源性。

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此用户已注销

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抗体是机体在抗原物质刺激下,由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。克隆之后的子体与母体有相同的基因但是不存在抗原刺激没有抗体产生。由于不是基因突变导致的,只是杂交瘤细胞克隆子体不能产生抗体。

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小小翻车鱼

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抗体效价测试无法检测到效价的原因可能有以下几点:


1. 抗体问题:确认使用的抗体是一抗,并且针对您的实验目标具有特异性。同时,确保抗体在有效期内且储存条件适当。


2. 样本处理:在样本处理过程中,可能存在非特异性的蛋白质-抗体结合,导致效价无法检测。检查实验步骤,确保没有非特异性结合。


3. 一抗浓度:一抗浓度过高或过低都可能影响效价。优化一抗稀释比例,并按照说明书推荐的范围进行实验。


4. 二抗浓度和孵育时间:检查二抗浓度和孵育时间是否适当。优化二抗稀释比例和孵育时间,以提高检测灵敏度。


5. 检测方法:确认您使用的检测方法(如ELISA、Western Blot等)适用于您的实验目的。


6. 背景过高:高背景可能会导致效价检测失败。确保实验过程中遵循最佳实践,以降低背景干扰。


7. 竞争性抑制:在检测过程中,如果存在与目标抗原类似的分子,可能会导致竞争性抑制。确保实验条件不会引入竞争性抑制。


8. 实验操作:实验操作不规范可能导致结果偏差。确保遵循正确的实验步骤和操作规范。


在排除以上可能性后,如果仍然无法检测到效价,可能需要重新评估实验设计,或者考虑使用其他方法(如免疫荧光、质谱等)进行检测。

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粥辰辰辰辰

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抗体是机体在抗原物质刺激下,由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。克隆之后的子体与母体有相同的基因但是不存在抗原刺激没有抗体产生。由于不是基因突变导致的,只是杂交瘤细胞克隆子体不能产生抗体

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