huarenqiang5
可以按以下步骤进行:
1、琼脂平板制备
按照营养琼脂干粉说明来进行稀释,稀释后琼脂放在微波炉里进行加热,加热后琼脂移至超净工作台中,静置待温度降至50℃(手指能接受的最高温度)左右时,开始倒平板,内径225px平皿每个平皿倒入约10ml琼脂液,倒入后迅速混匀铺满平皿底部。
2、药液制备:按药品使用说明书上的配料或饮水浓度配置按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料,就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10g药物可配50kg饲料,其换算方法为:1g本品加5000ml蒸馏水。此溶液液即为用于做药敏试验的药液。
3、药敏纸片制备:要用质量较好的定性滤纸,用普通的打孔器打成直径6mm的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中,以单层牛皮纸扎口或包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后,置于37℃温箱或烘箱中一天,使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0.01ml计,在上述含有50片纸片的小瓶内加入药液0.5ml,不时翻动,使滤纸片将药液均匀吸净,一般浸泡30分钟即可。同时在记录药物名称,于37℃温箱过夜。在温箱或烘箱中的时间不宜过长,以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低温下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮,置阴暗干燥处或家用冰箱中保存,有效期4-6个月。
4、病料接种
取新鲜病料组织于超净工作台中或酒精灯旁,剪取新鲜组织断面无菌涂抹到营养琼脂板上,涂布整个琼脂平板表面,反复涂布几次,保证涂布均匀。
5、贴药敏纸片
用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压,使纸片与培养基表面完全接触。为了能准确观察结果,要求药敏纸片均匀分布于培养基上,位置安排适中,防止出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm,可在平皿中央贴一片,外周等距离贴7-9片。记住每种药敏纸片的名称。
6、温箱培养
贴完药敏纸片的平皿倒放在37℃恒温箱中培养24小时以上。
土井挞克树
可以做琼脂平板铺板,纸板效果很差。
dxy_ursr46nw
您好,我本身不是做这个方向的。虚心求教,您可以解释下如何操作吗?另外,霉菌实验不是一般都用PDA培养基吗?感谢答复。
loveliufudan
细菌和霉菌在生长和营养需求上存在差异,因此在药物敏感性试验中的操作也不同。虽然纸片扩散法可以用于测试某些霉菌的敏感性,但通常更常用的是平板扩散法。
平板扩散法可以用于测定霉菌对药物的敏感性。在这种方法中,制备含有药物的琼脂平板(例如PDA),然后用针头将霉菌孢子均匀地涂布在平板表面。接着将平板放置在适当的温度下(通常为25°C或30°C),等待霉菌生长。如果药物有效,则会观察到在药物周围有一个清晰的无菌区域,也就是所谓的抑菌圈。
需要注意的是,平板扩散法和纸片扩散法有一些不同,因此在进行药物敏感性试验时需要选择适当的方法。
dxy_ursr46nw
你好,感谢您的答复。想问一下纸片扩散法适用于哪些霉菌呢?本身不是做这个方向的,打算直接买平板,自己制作的话时间比较紧张,平板的效果也不好保证。
loveliufudan
纸片扩散法主要应用于抗真菌药物敏感性试验中,比如对念珠菌属、曲霉属、毛霉属等霉菌的药敏试验。不过,纸片扩散法对于一些非真菌类的微生物,比如放线菌等并不适用。因此,在对于非真菌类微生物的鉴定中,可以选择其他合适的方法。
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