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对于小鼠粪便样本的采集,建议采用拎尾法进行采集。小鼠排便后用灭菌的镊子夹取小鼠粪便,样本通常需 1g 左右,最少不低于 0.2g。样本采集后立刻放入-80℃冰箱进行低温保存,建议进行备份。若条件不允许,可短期(1 个月内)在-20℃冰箱中冷冻保存。注意在样本冻存期间,请勿反复冻融。 送样时请尽量使用冰盒(泡沫盒+干冰+冰袋),以保证运输过程中的低温条件(干冰的挥发消耗量约为 3 公斤/天)。在打包时先放入足量的干冰,之后用冰袋填充泡沫盒中间的空隙,为了保持冰盒中的低温环境,建议采用厚一点的泡沫盒。
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对于粪便样本的冻存,一般采用以下步骤:
收集新鲜粪便样本,并尽可能在室温下快速处理。
使用无菌取粪器取得一定量的粪便样本,并转移至无菌离心管中。
将离心管离心,去除上清液,保留细胞沉淀。
加入等体积的保护液(如10%甘油,20%甘露醇等),缓慢混匀,将混合液分装至无菌冻存管中。
冻存管快速放入-80℃冰箱中,冷冻保存。
在使用冻存样本前,可以将冻存管放置于4℃冰箱或室温下缓慢解冻。注意,解冻时不要使用高温水浴或快速旋转离心等方式,以避免样本的破坏和损失。
另外,需要注意的是,粪便样本的冻存过程中,不同细菌菌株的存活率和稳定性可能存在差异,因此建议在冻存前进行一定的培养和筛选,以保证移植后的效果。
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可以液氮负80度迅速冷冻保存。