土井挞克树
20%奶粉煮沸,冷却脱脂,分装小试管,每管1ml,8磅15分钟灭菌备用。
将纯种菌接种于平板,37℃16小时培养,以接种环刮取菌苔2-3环于牛奶中混匀,试管用硅胶塞,冻存于普通冰箱冷冻室(-12℃-18℃)。使用时取出室温溶解,待部分溶解时即可取一环接种平板,并将试管再迅速冻存,这样可反复使用3-5次。此法一般菌株可存活48个月,少数如奈瑟氏菌、甲链、白喉等可存活14-30个月。
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牛奶没用过,只用过25左右的甘油,配置50%的甘油,加菌液,1:1,直接放-80保存。
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取3ml脱脂奶粉乳液加入待保存菌种平板内,用取菌环刮取菌落,轻轻磨匀。以微量加样器量取0.3ml菌悬液加入2ml冻存管,加盖拧紧4℃冰箱保存20min,再转到-20℃冰箱速冻30min。取出
后,将盖稍拧松放于真空冷冻干燥机中,真空干
燥24h。冷冻干燥结束后,将盖拧紧,于-70℃
冰箱保存。
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20%脱脂奶粉保存菌种的方法一般包括以下步骤:
1.准备20%脱脂奶粉溶液:称取20克脱脂奶粉,加入100毫升去离子水中,充分搅拌至溶解,然后通过滤器或高速离心去除残留的固体颗粒。
2.准备菌液:从菌落或液体培养物中接种适量的菌株,进行培养,待菌落或菌液生长到对数或稳定期时,进行下一步操作。
3.制备冻存物:将菌液通过离心分离菌细胞,去除上清液,保留沉淀。将沉淀用20%脱脂奶粉溶液调至适宜浓度,再分装到冻存管中,每管大约加入0.5-1毫升的菌液,并标明菌株名称、培养日期、保存温度等信息。
4.保存冻存物:将制备好的冻存物置于-70°C以下的冰箱中保存,保证菌株长期保存的稳定性。
此外,在制备冻存物时,还可以加入一些保护剂,如甘油、DMSO等,以提高冻存物的保存稳定性。
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