求助BV2细胞的缺糖缺氧模型

建议从以下几点进行分析和改进:

1、接种时，细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不一致。

2、建议采用多通道移液器斜贴着培养板壁加样，减少平行孔间的误差，不要插到培养基液面下加样，容易产生气泡，干扰OD值。

3、若加样时产生了少量气泡，可以轻拍板壁，或者使用一次性针头戳破气泡。若实在无法去除，且测得数值误差较大，可以考虑去除该数值。

4、细胞培养板最边缘一圈孔培养液易挥发，为减少实验误差，建议最边缘一圈孔只加入培养基。加样区周围一圈建议也加上培养基，减少实验误差。

5、若细胞培养时间较长，培养基颜色或 pH 发生变化，建议更换培养基后再加 CCK-8。

6、CCK-8加入剂量：一般建议按培养体系的10%添加，添加过程中应避免产生气泡，气泡会影响到后面数据读取的准确性。

7、加 CCK-8 试剂时速度要快，减少试剂在移液器上的残留，加入 CCK-8 试剂后轻轻震培养板，为了避免加样时由于 CCK-8 残留在枪头上所带来的误差，可以在加样前用培养液稀释 CCK-8 试剂并混匀后加样。

8、CCK-8加入后孵育多久观察：一般悬浮细胞孵育的时间要长于贴壁细胞，一般贴壁细胞孵育2 h左右，悬浮细胞是4 h左右，由于CCK-8的OD值处在0.8-1左右是比较好的检测结果，建议实验者可以每隔0.5 h测定一次OD值，以摸索出最佳孵育时间。

9、一些物质会影响CCK-8的实验测定结果，当培养体系内含有还原性物质存在时会还原WST-8，从而使OD值增加；当有氧化性物质存在时会抑制还原反应进而使OD值减小。

10、可以使用大于600 nm的波长，例如650 nm，作为参考波长进行双波长测定，CCK-8在参比波长处没有吸光值，设定参比波长的目的是为了除去由于样品浑浊所带来的吸收。

11、CCK-8反复冻融会增加背景值，干扰实验测定。强烈建议分装保存。

12、建议每次做标准曲线。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞，标准曲线需要每次都做。

缺氧时间延长至12小时，复氧12-24小时均可

针对你在Bv2细胞的缺糖缺氧模型中遇到的问题，以下是可能的改变条件的建议：

1. 缺糖缺氧条件：尝试调整缺糖缺氧的时间和程度。你可以根据文献或其他相关实验的建议，尝试更长或更短的缺糖缺氧时间，并观察细胞的反应。此外，确保在缺糖缺氧期间维持合适的培养基温度和缺氧环境。

2. 缺氧后复氧条件：复氧后的培养基中添加足够的糖供应，确保细胞能够有效地恢复代谢。尝试增加复氧时间，例如延长至48小时，以促进细胞的恢复和生存。

3. 细胞密度和孔板条件：检查细胞的密度是否适当，确保在铺板时细胞均匀分布。此外，检查孔板的质量，确保孔板不会对细胞的生长和存活产生负面影响。

4. 细胞形态的观察：尝试使用显微镜观察细胞形态的其他方法，如荧光染色或其他细胞标记技术。某些情况下，细胞形态的变化可能不易在常规显微镜下观察到，但其他技术可能提供更敏感的细胞反应指标。

5. 细胞存活和代谢指标：除了CCK-8检测细胞代谢活性外，考虑使用其他细胞存活和代谢指标，如荧光染色、MTT（溴化四唑盐）测定等。这些方法可能提供更全面的细胞响应信息。