小鼠取材问题

1.将实验小鼠脱颈处死，75%乙醇浸泡5min，固定，备皮，取背部皮肤至于含双抗的冷PBS缓冲液中。

2.仔细剥离脂肪，血管等多余组织，PBS清洗，加胰酶消化1h。

3.分离真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。

4.将真皮部分于培养皿内剪碎，加入适量胰酶，转移至15ml离心管内，37℃恒温水浴消化1h。

5.消化结束后，加入H-DMEM完全培养基终止反应，1000rpm离心5min，弃上清。

6.PBS清洗一遍，离心弃上清。

7.将清洗后的组织块均匀铺于6cm培养皿内，加入2ml完全培养基，37℃，5%CO2培养箱内培养24h。

8.第二天，补充培养基至5ml，继续培养，3-4天后有细胞游出。

9.7天后已有大量细胞游出，去除组织块并换新鲜培养基继续培养。

进行小鼠皮肤组织的取材和包埋盒固定是进行切片制备的重要步骤。以下是一些建议来确保皮肤组织的取材和固定过程中不卷曲：

1. 取材前的准备：

- 使用新鲜的、尖端锋利的手术刀或剪刀，确保切口平整和准确。

- 提前准备好冷冻盒和组织保存液，以确保组织的保存和保持完整性。

- 在取材前，确保小鼠已经被适当麻醉，并遵循动物实验的伦理规定。

2. 取材的技巧：

- 将小鼠放置在合适的工作台上，确保操作区域干净整洁。

- 使用手术刀或剪刀沿着皮肤瘤边缘进行切割，尽量保持切口平直，并避免扯断组织。

- 尽量避免过度拉伸皮肤，以防止组织的损伤和卷曲。

3. 包埋盒固定：

- 将取得的皮肤组织立即放入含有合适的固定液（如10% 缓冲福尔马林）的试管中。

- 在试管中固定组织的时间通常是根据组织大小和类型来确定的，可以参考相关文献或专家的建议。

- 将固定后的组织转移到含有适当浓度的酒精（如70% 酒精）的试管中，以去除固定液。

4. 制备切片：

- 将固定并去除固定液的组织放入包埋盒中，使用熔化的石蜡将其浸泡。

- 在组织固定后，将包埋盒放入冷冻盒中，并在冰上迅速冷却，以使石蜡固化。

- 使用旋转式或滑动式切片机，制备具有适当厚度的组织切片。

为了确保皮肤组织不卷曲，注意以下事项：

- 在取材和处理过程中尽量避免拉伸组织，以防止损伤和变形。

- 确保固定时间适当，以确保组织固定得足够坚硬，但不至于过度硬化。

- 在包埋盒中安置组织时，尽量使组织平坦且没有皱褶。

- 注意石蜡浸泡和固化的温度和时间，以避免组织卷曲。

小鼠皮肤组织取材：

1. 选取实验组和对照组，各选2只左右；

2. 麻醉小鼠；

3. 用剃毛器将小鼠背部皮肤毛发剃去；

4. 用碘伏酒精涂抹取皮部位，用手术剪刀剪取背部皮肤；

5. 用碘伏酒精涂抹取皮部位，放回饲养笼继续饲养；

6. 将背部皮肤以真皮面朝下的方式平铺在滤纸上；

采取皮肤标本的方法主要有：手术切取法、环钻法、削取法等。

其中手术切取最常用，适应于各种要求及大小不同的标本。切取时应注意：

①切缘锐利整齐；

②切口方向尽量与皮纹一致，两端对齐；

③应夹持组织两端，切忌夹持组织中间，以免夹坏组织影响观察；

④切取标本应足够深、足够大。此方法特别适用于肿块等皮下病变的取材，对所有脂膜炎、血管炎及脱发的鉴别宜采用手术切取法。同时提倡采用该方法对皮肤肿瘤进行检查。