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确定药物的作用时间可以根据您的研究目的和具体实验设计进行考虑。以下是一些常见的方法来确定药物作用时间：

1. 文献调研：在进行实验之前，进行文献调研是非常重要的。查阅相关研究中使用相同药物的实验方案和结果，了解已有文献中推荐的药物作用时间。

2. 初步实验：进行一系列初步实验来评估不同时间点的药物作用效果。选择几个关键时间点，例如24、48和72小时，根据实验目的逐步调整。通过评估细胞生存率、细胞形态、药物效应等指标来确定最佳的药物作用时间。

3. 实时监测：使用实时细胞分析仪器（Real-Time Cell Analysis）或其他适当的实验技术来连续监测细胞的生长、增殖或药物效应。这样可以获得更详细和动态的信息，帮助确定药物作用的最佳时间点。

4. 剂量反应曲线：在确定药物作用时间的同时，还可以结合绘制剂量-反应曲线来计算药物的IC50值。这可以帮助确定合适的药物浓度范围和作用时间。

24.48.72小时都要做，然后以时间分析ic50

要看你想要多久的IC50了，一般细胞毒药物求IC50是48h或72h。