小鼠心肌石蜡切片WGA染色

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切片准备 染色步骤

1. 
2. 复染和封片。以及注意事项

1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.

2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.

注意:

(1). 固定液量应为组织块体积的40倍.

(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h.

(3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.

(4)固定容器应大些.

3. 漂洗: 流水冲洗2—10h.

4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.

70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(60-120’).

5. 透明: 组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.

染色步骤：

第一步：组织处理

首先，需要从病人的心脏组织中取出一小块样本，并且将其固定在4%的中性缓冲甲醛中。这一步骤的目的是保护细胞结构和避免细胞损伤。

第二步：脱水

将固定的组织样本放入75%的乙醇浸泡1小时，然后转移至95%的乙醇中浸泡30分钟。最后，将组织样本放入100%的乙醇中浸泡30分钟

第三部：染色

将切片放入PBS中加入WGA荧光素标记物，室温孵育2小时；然后将切片放入PBS中洗涤3次，每次5分钟；再将切片加入DAPI荧光素标记物，室温孵育30分钟，最后将切片放入PBS中洗涤3次，每次5分钟。

以下是小鼠心肌石蜡切片WGA染色的步骤：

取出石蜡切片，去蜡和水化。

将切片放入含有PBS（磷酸盐缓冲液）的显微孔板中，每个样品一个孔位。

加入0.1% Triton X-100（PBS中），孵育10分钟，用PBS洗涤三次。

加入WGA溶液进行染色。WGA的浓度和时间可以根据实验需要进行优化。通常WGA浓度为5-20 µg/mL，染色时间为30-60分钟。

用PBS洗涤三次，每次洗涤5分钟。

加入DAPI（4',6-diamidino-2-phenylindole）染色液，孵育10分钟，用PBS洗涤三次。

反转玻片，加入适量的抗褐变胶水封盖，观察荧光。

WGA的配制方法如下：

取出一定量的WGA粉末，根据实验需要称取所需的重量。

将WGA粉末加入无菌PBS缓冲液中，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。

将溶液进行过滤灭菌，可以用0.22 µm的滤器进行过滤。

需要注意的是，在使用WGA进行荧光染色的时候，需要控制好染色的浓度和时间，以免过度染色影响后续的观察和分析。同时，在染色前需要保证样品处理的充分和均匀，以保证荧光信号的可靠性和一致性。

小鼠心肌石蜡切片WGA染色的步骤：（1）将切片放入xylene中去蜡，每次5分钟，共3次；（2）用100%乙醇洗涤5分钟，再用95%乙醇洗涤5分钟，再用70%乙醇洗涤5分钟；（3）将切片放入PBS中洗涤3次，每次5分钟；（4）将切片放入PBS中加入0.1% Triton X-100，室温孵育30分钟；（5）将切片放入PBS中洗涤3次，每次5分钟；（6）将切片放入PBS中加入WGA荧光素标记物，室温孵育2小时；（7）将切片放入PBS中洗涤3次，每次5分钟；（8）将切片加入DAPI荧光素标记物，室温孵育30分钟；（9）将切片放入PBS中洗涤3次，每次5分钟。