请问，组化拍片，DAB颜色很深，不明亮，像树皮的颜色。我的DAB是5s左右就放入PBS洗了，不知道为什么会这样。​

显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间； 此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间。

1、 抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。

2、 一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。

3、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；

4、 非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；

5、 DAB孵育时间过长或浓度过高；

6、 PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤为重要；

7、 标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。

染色时间长了，可能是抗体孵育的时间过长所以非特异性着色太深。

DAB（3,3'-二氨基苯基丙烷）是一种常用的显色剂，在免疫组化实验中通常用于检测靶蛋白的位置和表达水平。DAB显色结果的深浅和明暗程度取决于多个因素，包括DAB浓度、显色时间、pH值、缓冲液成分等。根据您提供的信息，有以下几种可能的原因：

DAB浓度过高或显色时间过长：您提到DAB显色时间仅为5秒，但如果DAB浓度过高或者显色时间过长，就会导致显色结果过于深色。建议尝试减少DAB浓度或者显色时间来调整显色结果。

缓冲液pH值不适宜：DAB显色需要一定的pH值范围来发挥最佳效果，一般为pH 7.0-7.6之间。如果缓冲液pH值过高或过低，都会影响显色效果。可以尝试使用不同pH值的缓冲液来进行显色，找到最适合的条件。

组织切片处理不当：如果组织切片厚度不一致、切片后的处理时间过长或者处理温度过高，也可能会导致DAB显色结果不理想。建议在组织切片前注意切片厚度的一致性，并尽快进行下一步处理。

孵育条件不适宜：如果染色温度过高或者时间过长，也可能会导致显色结果过于深色。建议在染色过程中注意孵育条件，控制温度和时间。

总之，DAB显色结果深色的原因有很多种可能，需要综合考虑多个因素来进行排查。建议进行逐一排查，找出问题所在并进行调整。