huarenqiang5
一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体。比如抗人的CD56带FITC标记的抗体,抗体来源是MouselqG1,K链,那么它的同型对照就应该是FITC标记的MouselgG1K链。
如果抗体是组合形式,如纯化的一抗+荧光标记的二抗,那么应该选择一抗的同型对照。比如CD86的纯化抗体,成分是MouselgG1k链,它的同型对照是纯化的MouselgG1,K链,如果实验用到的二抗是PE标记的抗小鼠lqG1。那么染色方式如下-------样本管:纯化的CD86+PE标记的抗小鼠lgG1(二抗)+样本,同型对照管:纯化的同型对照(MouselgG1K链)+PE标记的抗小鼠lgG1(二抗)+样本。
如果没有找到完全匹配的同型对照,在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下。优先选择的顺序应该是亚链不同--亚型不同。比如,某种的抗体的来源是MouselgG2a,K链。如果找不到完全相同的同型对照,那么优先选择相同荧光标记的MouselgG2a;如果也找不到合适荧光素标记的MouselgG2a,那么优先选择相同荧光标记的MouselgG2b;如果还是没有找到MouselgG2b,那么可以选择相同荧光标记的MouselgG2作为同型对照。
土井挞克树
同 型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型 对照是真正意思上的阴性对照,它不但可以用来设定流式细胞仪的电压,而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。
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