流式细胞术样本的上样电压（前向、侧向、荧光通道）究竟如何调整才是一个合适的值？

电压调节除了默认设置的PMT管电压外，最重要的是电压调节补偿，比如下图显示，可通过降低电压来优化补偿，达到合适的值。

电压调整比较复杂，大约分为三部分

首先我们需要调节的是细胞物理图显示的电压，即FSC和SSC的电压，这个可以用空白管细胞进行调节，需要注意的是如果细胞进行了固定破膜处理，那么空白管也必须是固定破膜处理的细胞，因为细胞进过固定破膜处理后会缩水变小，和未处理细胞物理分布图不一样，一般情况下通过调节FSC和SSC电压，使细胞群体分布在坐标轴的中央部位，如果检测的目标细胞体积较小，可以适当提高电压值，使目标细胞与细胞碎片在流式图中能够完全分离；如果检测的目标细胞体积较大，可以适当降低电压值，使所有的目标细胞群完整显示于流式图中，防止细胞群接近于流式图的边界而变形扭曲或者完全处于边界外。

其次我们需要调节每个荧光通道的电压，荧光通道电压调节最好用峰图显示，每个荧光的单染管都要进行上机调节，一般我们以阳性群细胞的峰值与仪器显示的最高对数值少一个数量级（例如仪器最高可以显示106，那么阳性群峰值在105左右）为准。阴性细胞群从0显示起峰，当然有时候需要考虑到荧光补偿的影响，我们会通过降低荧光通道的电压，来减少荧光的溢漏，这种情况会导致阴性细胞群体压边（部分阴性细胞在图上不显示）。

最后我们需要将荧光补偿干扰的两两通道用散点图显示出来，在上机分析对应的单染管进行补偿调节，将所有通道补偿参数确定后，电压才能确认，如果有的补偿参数调节不好，需要通过平衡电压来优化（以下详述），优化电压后再来确定补偿。