成年大鼠下丘脑神经元培养

取当日新生的 SD 大鼠，在超净工作台内断颈处死，75%酒精浸泡消毒，解剖显微镜下分离胎鼠皮肤及脑膜，PBS 冲洗干净。用眼科剪去掉部分大脑皮质，下丘脑组织位于视交叉和视乳头之间两侧下丘脑沟以内，向背侧大约 2mm 深。用眼科镊夹取深约 0.5—1mm的下丘脑组织块到烧杯。PBS 轻柔冲洗取下的下丘脑组织 4-5 次。

2,分离细胞

剪下的下丘脑组织经Hanks液冲洗后仔细剪碎成约1m㎡的小块。加入0.25%胰蛋白酶溶液37℃下消化30分钟,再以吸管吹打直至分散为单细胞悬液。每一新生鼠下丘脑约可分离出1.2×10°个细胞，加入DMEM培养液(体积1：1,含10%的胎牛血清)，吸管轻柔吹打20次后用150目尼龙膜过滤细胞。离心细胞1200转/分，5分钟弃上清，以基础培养基洗涤细胞3次后悬浮细胞，记细胞数。

3,细胞培养

以2×10°细胞/毫升密度接种细胞至25cm培养瓶，每瓶分别加以培养基5ml培养24小时后，取细胞悬液离心后取沉淀细胞免疫组化鉴定细胞。更换培养瓶继续培养。饱和湿度，5%COr，37℃培养基PH7.2条件下培养9天。分别在第1、3、5、7、9天取细胞悬液，倒置目镜观察细胞形态。

你可以参看这篇文章”大鼠下丘脑神经元培养的新方法”，”成年大鼠下丘脑神经元原代培养及形态学”讲解的都很详细。