怎么最大可能筛选到高细胞活性

胰酶消化不能过，反复吹打次数也别太多，保证比较高的细胞浓度，都可以提高细胞活动。

一，ATP含量测定法---生物发光检测

有研究表明内源性三磷酸腺苷(ATP)的数量可以反映细胞的活性度。内源性ATP是活体细胞最基本的能量来源，细胞死亡时，ATP迅速水解。因此，测定细胞内源性ATP的含量可以及时反映细胞的活性和活细胞数量，基于ATP的细胞活力检测法是一种敏感而可靠的检测方法。

反应原理是活细胞在有氧和ATP的条件下，荧光酶催化荧光素发出荧光(波长为562nm)，强度与ATP含量呈正相关。故所测得荧光强度可间接反映出存活细胞量。

二、荧光法检测

一些荧光染料对死细胞和活细胞有不同的作用效果，利用荧光显微镜检测细胞活性。如碘化丙锭(PI)，被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡细胞的细胞膜，因此活细胞不被染料染上色，只有死组胞或是凋亡细胞才能染上红色。吖啶橙(AO)能透过质膜完整的细胞，嵌入细胞DNA，使之发出明亮的绿色荧光。溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入DNA，发橘红色光。也可应用AO-EB双染法鉴定细胞活性。这种检测方法相比传统的染料，具有灵敏度高，操作简便，结果容易分辨等特点，而日利用双染法还可以分解活细胞，调亡早期细胞，调亡晚期细胞、死亡细胞，在细胞凋亡的检测上有很广泛的应用。

AlamarBlue是一种安全、稳定、易溶于水、且对细胞无毒的新型染料，可通过荧光产生或颜色变化指示细胞的代谢。活细胞线粒体酶能够将蓝色的氧化形式AlamarBlue变成红色的还原同时发生可品化的荧光变化，无活性的细胞不能还原Ala marBlue，荧光的强度或红色的强度反映了细胞增殖的程度其颜色变化可用酶标仪测定:荧光变化可用荧光测定仪检测激发波长530nm.散射波长590nm.使用荧光方法时具有更优秀的敏感性。AlamarBlue法操作简便，特异性和灵敏度高，重复性好，且AlamarBlue的使用不影响细胞正常代谢及基因表达，可在无菌条件下测定后继续培养扩增细胞，有利于对培养细胞的连续监测及深入研究。但由于AlamarBlue的分解产物是偏红色的，所以只能用无酚红培养基，且对培养的时间要求也相对MTT法来说要苛刻。

三、 比色法检测法

1、可以在重悬细胞的时候 PBS 中加入 1%-2%的胎牛血清。

2、大部分流式分选仪的上样器均没有冷却系统，要想分选后获得比较好的细胞活性，应尽量 减少细胞在室温的暴露时间

3、样本较多的时候可以分成小份体积上样，每次 1ml 或者 2ml，剩下的放在冰箱冷藏。

这样分选的时候能较好地提高分选出来的细胞活性。