淋巴结组织分散成单个细胞

三种方法，分别是粘附贴壁法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法。

一、粘附贴壁法

我们将单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，37℃温箱静置1h左右，这时候你会发现，“死皮赖脸”的单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上，而未贴壁的细胞几乎为纯淋巴细胞，随后用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。那么此时就达到一个分离的效果。

但注意因为B细胞也有贴壁现象，分离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。

二、吸附柱过滤法

同样将单个核细胞注入柱层中，单核发挥其“死皮赖脸”的优势，赖在柱层上不肯下来，我们进行柱层洗脱，那么能洗脱下来的就是淋巴细胞。

三、磁铁吸引法

前面一直说单核细胞“死皮赖脸”，到这一方法还多了一个特点——“贪吃”。

利用单核细胞具有吞噬的特性，我们在单个核细胞悬液中加入羰基铁颗粒，那么单核细胞就会“吃掉”这些铁颗粒，我们在管底放一磁铁，那么能被吸至管底的就是吞噬了铁颗粒的单核细胞，显然上层就是淋巴细胞。

一、切割分离法

在进行组织块培养时，可采用剪切法，一般多剪切成1 mm3大小的块。

具体操作如下：

1. 无菌切取1 cm3组织一块，置入青霉素瓶或小烧杯中，左手斜持容器，右手持眼科尖剪或弯剪（剪柄较长为好）伸入容器中，反复剪切组织至1 mm3大小为止（成糊状）。

2. 用吸管吸取Hanks液把附着在剪刀上的组织小块冲下，并再补加3~5 毫升Hanks液后，用吸管反复轻轻吸吹冲打片刻，低速离心、去上清、余下组织块即可用于培养。

3. 剪刀剪切法可能对组织有一定损伤，但操作比较方便。

亦可用手术刀反复切割法，把组织块放在凹窝玻璃中，两手各持尖手术刀一把，交错反复切害割至1 mm3为止。手术刀切割法对组织损伤较小，但在空气中暴露时间较长，污染机会大些。

以上两方法都适用于组织块培养法

二、机械分散法

某些软组织如脑、胚胎以及一些肿瘤组织等，可采用机械法进行分散。

常用者有两种，一是把组织放入注射器针管中压挤法，二是把组织置于不锈钢纱网中用钝物压取法。

不论用那一种方法，都应把组织块先剪成小块后再处理。

其中以压取法较多用，其程序如下：

1. 清洗

取得组织后，先用BSS洗去表面血污，然后预切成5~10 mm3的小块，置入不锈钢网筛中（1 mm 孔径）；

2. 压挤

把网筛放在大碟皿上方，一手持网筛柄，另手用无菌度管末端径轻压挤组织，使之穿过纱网，然后用吸管吸取营养液把纱网上剩余组织吹洗掉；

3. 反复

用吸管从碟皿中吸出较大组织块，置入10 μm 筛中，进行再压挤，方法同2；

4. 镜检

被滤过的悬液即可用于培养；可先吸取不许悬液镜检，如组织块过大，可再用20 μm 筛做进一步压挤，以分散成单个细胞或细胞团；

5. 培养

计数细胞后，接种培养。

你需要买个玻璃匀浆器，如果手工的话，否则还是找个机器碎比较方便。