小鼠粪便移植

收集新鲜粪便样本，并尽可能在室温下快速处理。

使用无菌取粪器取得一定量的粪便样本，并转移至无菌离心管中。

将离心管离心，去除上清液，保留细胞沉淀。

加入等体积的保护液（如10%甘油，20%甘露醇等），缓慢混匀，将混合液分装至无菌冻存管中。将冻存液融化然后把过滤得到的微生物通过灌胃针喂给小鼠

粪便移植步骤：

1.按照物品无菌传递要求，将密封装有菌液样品的离心管传递进入隔离器内。

2.提前将8号或10号小鼠灌胃针和1mL注射器经高温高压灭菌后，按照物品无菌传递要求传入无菌隔离器内。

3.用1mL注射器吸取菌液，将灌胃针与注射器相匹配，详细操作见视频1。

4.打开笼盖，用右手拇指和食指提起小鼠尾巴中部，并将小鼠放置在笼盖上。

5.称量小鼠体重，根据小鼠体重进行灌胃，灌胃量约为10μL/g。以每只无菌小鼠体重平均20g为例，小鼠灌胃的体积约200μL，菌量约2×107-2×108cfu。每次使用仅打开一次，未用完丢弃。

6.用左手拇指和食指第一、二指节抓住无菌小鼠耳后的颈部皮肤将其拎起，用无名指和小指夹其背部皮肤和尾部将其固定，同时应防止动物窒息。使其头、颈和身体呈直线。

7.灌胃针头从动物嘴角进入，压住舌头，抵住上颚，轻轻向内推进，进入食管后会有刺空感。

8.将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食道，回抽注射器无空气逆流方可注入菌液。

9.观察动物的反应，如无过度挣扎，可尝试推注，如阻力较小可推注所有药物，如阻力过大或动物反应剧烈，呼吸受阻，可缓解后再进行灌胃操作。

10.松开动物，观察动物呼吸，如无呼吸异常，可确定灌胃成功。

11.为提高微生物移植效果，可用等量菌液对小鼠下腹部和背部皮肤进行涂抹（以皮肤被毛浸湿为准），小鼠可通过自身或相互舔舐摄取菌群；对于未断奶仔鼠的微生物移植，可在母鼠乳头部位涂抹菌液。

移植方法：微生物样品经过处理后，通过灌胃的方法，将微生物由小鼠口腔直接注入到小鼠胃中，使其在小鼠肠道定植，从而实现无菌小鼠肠道微生物移植，研究微生物在无菌小鼠的功能和作用机制等。