sswei
可以尝试以下几种方法:
1. 更换质粒:可能是因为质粒本身的问题导致转不进去。可以尝试更换另一种质粒,以确保其质量和兼容性。
2. 优化转化条件:转化条件如质粒浓度、农杆菌菌液浓度、转化时间、转化温度等,都可能影响转化效果。可以尝试调整这些条件,以优化转化过程。
3. 使用不同类型的转化方法:如果一种转化方法不成功,可以尝试使用其他类型的转化方法,如电转化、lipofectamine等。
4. 检查菌种状态:农杆菌的状态也会影响转化效果。可以检查农杆菌的生长状态、是否老化、是否含有过多的杂菌等,以确保其处于良好的状态。
5. 检查试剂质量:试剂如质粒提取试剂盒、酶、抗生素等的质量也可能影响转化效果。可以检查这些试剂是否过期或变质,是否正确保存和使用。
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具体还是要好好看看说明书的,有时候转染要注意时间和浓度的。其他转染剂也是可以试试的。
loveliufudan
使用碧云天lipo8000转染A2780细胞失败的原因可能有以下几点:
1. Lipo8000适合脂质体较大的质粒转染,对于小质粒转染效率可能不高。您可以尝试其他适合小质粒转染的脂质体转染试剂。
2. A2780作为卵巢癌细胞,可能表面不存在lipo8000所需的受体或表面电荷差异大,导致转染困难。可以试试阳电变性的lipo8000。
3. 转染参数需要进一步优化,如脂质体和DNA比例、孵育时间等。您可以参考文献寻找A2780转染的经优化方案。
4. 可以试试其他转染试剂,如Lipofectamine 2000/3000,本身带正电荷,转染效率较高;或者尝试琼脂糖法等物理转染方法。
5. 如果其他转染试剂也不工作,可以考虑通过病毒感染的方式导入质粒。
6. 确保质粒本身无损伤,并带有适合该细胞驱动表达的启动子。
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一般是三个东西容易出问题,你自己看看:
1.质粒:是否反复冻融,存放时间长短,质粒抽提的试剂是否改变,质粒是否重组
2.转染试剂:存放方式,存放时间,是否变质,是否更换转染试剂
3.细胞状态
秋秋欣欣
可以试试用赛默飞的转染试剂,要好一些