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hela细胞用lipo2000转染一直转染不进去,转染GFP基因也不行,没有荧光。我用的六孔板,每个孔1μg质粒2μl lipo2000。汇合度60%的时候转的,问题到底出在哪里啊!朋友们
loveliufudan
HeLa细胞转染不成功的原因可能有以下几点:
1. Lipo2000与DNA的比例可能不适合HeLa细胞,可以试试调整这比例,增加Lipo2000量。
2. 汇合时间可能需要延长到10-15分钟,以提高Liposome包裹DNA的效率。
3. HeLa细胞状态可能不佳,需要用对数生长期的健康细胞。提前24小时换新培养基可以改善细胞状态。
4. 转染液加入细胞中的方式可以优化,滴加转染复合物要轻缓,平铺于整个培养皿。
5. 增加DNA量到2-3 μg/孔,Lipo2000量也相应增多,可能改善转染效率。
6. 尝试其他转染试剂如Lipofectamine 3000等,可能对HeLa细胞更有效。
7. 确保GFP质粒完整,序列正确。阳性对照也可以更换一种典型转染良好的细胞。
8. 转染24-48小时后再检测荧光,因为GFP的表达达峰值需要时间。
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.1.转染试剂与细胞不匹配
2细胞密度过低或过高
3转染试剂处理时间不当
4. 转染试剂质量不佳
5. 转染试剂浓度不合适
6细胞处理不当
毛利小五郎的徒弟
可以适当延长转染时间,可以提高成功率
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