用PLKO.1构建knockdown质粒，然后包病毒感染A375，使用puro杀完后传个三四代细胞就自己死了，这是为什么？

首先需要对细胞摸索药筛浓度，然后转染后药筛3-5d就恢复正常培养

这种现象可能是由于以下几个原因导致的：

质粒稳定性不好：PLKO.1是一种经典的RNAi载体，但是在某些细胞系中，质粒的稳定性可能会受到影响，导致载体丢失或者表达水平不稳定，从而影响细胞生长和存活。

抗生素浓度不合适：在包装病毒时，使用puro进行筛选，但是如果抗生素的浓度过高，会导致对细胞有毒作用，从而导致细胞死亡。建议在筛选过程中，逐步降低抗生素的浓度，找到适合的抗生素浓度。

细胞毒性问题：某些RNAi可能会对细胞的生长和存活产生负面影响，例如非特异性的RNAi干扰，或者对于某些重要基因的敲除可能会导致细胞凋亡。建议使用一些质控方法，如Western blotting或qPCR检测目标基因的敲低效果，以确认RNAi的有效性和特异性。

考虑手存在污染或者病毒感染失败。

我也试过这种情况，可能是细胞的问题，因为我同时做两种细胞，一个细胞没问题，另一个细胞就不行