【SOS】转染实验实在是搞不出来😭
clarasun
构了一套质粒，pcdh➕1个oe，plko➕3个sh，一共6个，带amp、gfp、puro。转293，一直是3个sh效率还可以（48h 70%），另外三个几乎转不上，每个孔只有几个细胞表达荧光。
质粒大小7-10k，浓度在200-500ng/ul，260/280和260/230都在正常范围。12孔板质粒1-3ug，脂质体2-5ul每孔，比例都梯度试过。293密度40-95%都试过。转染试剂用过pei/碧云天lipo8000/碧云天lipo293和翊圣脂质体。效果都差不多，有时候三个sh也很低。
跑目的蛋白wb毫无转染效果，但奇怪的是puro 10ng/ul筛细胞也不怎么死……
我转同门的质粒一次就成功，自己的这套就死活转不进😭求大佬指点可能出现问题的点。会是启动子或者载体选择有问题吗？可是pcdh和plko载体都是很成熟的商品了……
要毕不了业了啦😭
分享
3 个回答
毛利小五郎的徒弟
有帮助
你的试剂没有问题，考虑还是时间不合适，可以验证一下时间的适应性。
clarasun
目前各步骤的时间都是按试剂说明书操作的。时间适应性是指把dmem换成10%fbs的换液时间吗？
balalaLy
有帮助
可能是质粒不行，重新找引物构建质粒
clarasun
同规格换过一批质粒了，还是不行🥹
loveliufudan
有帮助
筛细胞时应该确保筛选的条件适当，并使用足够的puro毒素剂量。
转染效率可能受到转染试剂、密度等因素的影响，需要对这些参数进行调整。
如果使用了脂质体转染，请确保脂质体和质粒的比例适当。
在生物学实验中，尝试了多种不同的方法仍然无法获得期望的结果时，可能需要对质粒的设计和构建进行调整。
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序