【SOS】转染实验实在是搞不出来😭

构了一套质粒，pcdh➕1个oe，plko➕3个sh，一共6个，带amp、gfp、puro。转293，一直是3个sh效率还可以（48h 70%），另外三个几乎转不上，每个孔只有几个细胞表达荧光。

质粒大小7-10k，浓度在200-500ng/ul，260/280和260/230都在正常范围。12孔板质粒1-3ug，脂质体2-5ul每孔，比例都梯度试过。293密度40-95%都试过。转染试剂用过pei/碧云天lipo8000/碧云天lipo293和翊圣脂质体。效果都差不多，有时候三个sh也很低。

跑目的蛋白wb毫无转染效果，但奇怪的是puro 10ng/ul筛细胞也不怎么死……

我转同门的质粒一次就成功，自己的这套就死活转不进😭求大佬指点可能出现问题的点。会是启动子或者载体选择有问题吗？可是pcdh和plko载体都是很成熟的商品了……

要毕不了业了啦😭