包毒侵染Hela，puro筛选3-5天，等细胞不死的时候加dox诱导目的基因敲降，验证敲降效果后冻存

说明你没有敲除成功，或者这个蛋白还有别的通路控制。

目的基因敲除没出错的话，考虑冻存细胞复苏后的功能活性。

筛选没有完成，你需要看的是对照细胞在puro作用下都死掉，puro需要每2-3天换一次，细胞太密了，它也无法杀死细胞