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WB条带反白该怎么改进?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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验证蛋白(53kDa)有某种修饰。80v跑上层胶,120v跑下层胶(10%);270mA转膜70min,脱脂奶粉封闭1h,一抗abcam(1:1000)四度过夜,tbst洗膜1undefined3,二抗(1:3000)1h,tbst洗膜1undefined3。用的特超敏发光,和我的目的蛋白有同一种修饰的蛋白分子量在70,可以发出来,但是不清晰,发光液用两三次后整个膜是空白的,然后又重新配了发光液,把膜泡在显影液里,70kda的分子可以完全发出来,但是我的目的蛋白还是反白。图是第一次配显影液发出来的,把膜泡在发光液里,70kda可以很清晰的显影。请问条带反白该怎么改进

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