求问WB 的目的蛋白分子量160kDa，转膜条件怎么设定

在进行Western Blot（WB）分析时，如果目标蛋白的分子量为160 kDa，转膜条件应该注意以下几点：

1.膜材料：

对于大分子蛋白（如160 kDa），通常推荐使用PVDF（聚偏氟乙烯）膜，因为它具有更高的蛋白结合能力。

2.转膜缓冲液：

使用含有适量甲醇的转膜缓冲液。甲醇有助于蛋白质更好地结合到PVDF膜上，但过多的甲醇可能会导致蛋白质过度聚集，影响转移效果。通常，缓冲液中甲醇的比例为10-20%。

3.转膜方式：

湿转膜法更适合大分子蛋白的转移。湿转膜提供了更均匀的电场和较好的冷却条件，有利于大分子蛋白的转移。

4.转膜时间和电流：

由于160 kDa蛋白较大，可能需要较长的转膜时间。可以在低电流下进行较长时间的转膜，例如20-30 V过夜转膜。但具体条件需根据实验设备和样本情况调整。

5.预处理步骤：

对于大分子蛋白，有时在电泳前对样品进行轻微的加热处理（不要沸腾）有助于改善其在凝胶中的迁移和后续的转膜。

6.确认转移效果：

使用染色方法（如庞氏红或Coomassie蓝）检查转膜效果，确保蛋白已经成功转移到膜上。

对于160 kDa的蛋白，重点在于选择合适的膜材料，调整转膜缓冲液和转膜参数，并考虑进行必要的预处理步骤来确保蛋白的有效转移。不同的实验室条件可能需要适当调整这些参数。

我电泳buffer和胶用金斯瑞的，转膜参数为110v两小时，在层析柜里实验