NLRP3激活过程中，测细胞上清中儿-18的过程

 我用LPS和ATP刺激细胞后，细胞上清用甲醇氯仿法浓缩蛋白，然后用loading buffer溶解，大家是不是不太好溶解啊？然后跑WB空白一片，不知道什么原因，是因为细胞上清中儿-1B含量太少了吗？

具体实验操作如下：（1）将500μL细胞上清收集至EP管，3000rpm离心5分钟，取上清至新EP管。

（2） 加入等体积甲醇和1/4甲醇体积的氯仿，振荡

混匀，13000rpm离心5min后，见分层，留中问白

色蛋白。（3）加入500μL甲醇，振荡混匀，13000rpm离心5分钟后，奔液体。（4) 将EP管盖子打开，55°C金属浴加热5分钟。（5） 加入80 微μLundefinedSDS loading buffer溶解，100°C金属浴中煮样10min后取出进行Western Blot实验，用的15孔梳子，每孔7 μL。

问：①大家甲醇氯仿提取出的白色沉淀，用loading buffer溶解性好吗，我500 μL上清80μLbuffer勉强溶解。②为什么WB空白一片？抗体肯定是好的，因为细胞裂解产物的IL-1β跑的出来