wb目的条带连成一条，内参正常，可能原因

如果您的 WB（Western Blot）目的条带连成一条，但内参正常，可能的原因包括：

1.过度加载样本：

如果您加载的目标蛋白质样本过多，它们的条带可能会连成一条，因此请确保加载适量的样本。

2.抗体亲和力过强或浓度过高：

使用的一抗或二抗过于亲和或浓度设置得过高，导致过度染色。

3.过度迁移时间：

迁移时间过长可能会导致条带的扩散和连成一条，因此请确保迁移时间适当。

4.蛋白质浓度不均匀：

如果样本中的目标蛋白质浓度不均匀，某些部分可能会形成浓度较高的连续条带。尝试在样品制备阶段更好地均匀混合蛋白质。

5.阻塞不充分或过度洗涤：

如果阻塞步骤不充分或洗涤步骤过度，可能导致非特异性结合或信号过强。

使用10孔的梳子，孔越小越容易连成一片，此外用loading的时候浓一点，越稀越不容易分开。

1.检查用的胶的浓度和靶标蛋白的分子量是否适合 

2.上样量过高，有的人怕蛋白太少，蛋白浓度又低，蛋白加的太多，一般上样量20-25ug即可 

3.样品离子浓度高 

4.拔完梳子后，加样孔有残留的胶，这样上样量就少了，因此建议，拔梳子后一定要用水把残留的胶冲净，但也要注意，水一定要吸干，否则和残留胶一样会导致同样的结果。 

5.拔梳子时不要左右摇动，避免破坏加样孔底部。 

6.上样要迅速，否则会引起样品扩散。 

7.上样与跑电泳之间的间隔太长,尽量缩短时间间隔。 

8.装配三明治结构要迅速。 

9.电泳的电压太高，发热导致扩散。 

10.降低一抗浓度。 

11.可以适当缩短曝光时间。 

12.10%APS现配现用,APS长期存放也会引起同样的问题。

wb时连成一条线可能有以下几种原因：

1）上样量过大 这里指的是质量数过大

2）曝光时间过长，同样会由此现象。