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wb目的条带连成一条,内参正常,可能原因

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dxy_0n4xd762

内参和小分子量蛋白正常,分子量为60左右的蛋白条带间歇性的出现连成一条的情况,请问各位大佬,有可能是什么原因呢

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4 个回答

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百泰派克-李工

有帮助

如果您的 WB(Western Blot)目的条带连成一条,但内参正常,可能的原因包括:

1.过度加载样本:

如果您加载的目标蛋白质样本过多,它们的条带可能会连成一条,因此请确保加载适量的样本。

2.抗体亲和力过强或浓度过高:

使用的一抗或二抗过于亲和或浓度设置得过高,导致过度染色。

3.过度迁移时间:

迁移时间过长可能会导致条带的扩散和连成一条,因此请确保迁移时间适当。

4.蛋白质浓度不均匀:

如果样本中的目标蛋白质浓度不均匀,某些部分可能会形成浓度较高的连续条带。尝试在样品制备阶段更好地均匀混合蛋白质。

5.阻塞不充分或过度洗涤:

如果阻塞步骤不充分或洗涤步骤过度,可能导致非特异性结合或信号过强。


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周末也要努力呀

有帮助

使用10孔的梳子,孔越小越容易连成一片,此外用loading的时候浓一点,越稀越不容易分开。

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高山云初

有帮助

1.检查用的胶的浓度和靶标蛋白的分子量是否适合 

2.上样量过高,有的人怕蛋白太少,蛋白浓度又低,蛋白加的太多,一般上样量20-25ug即可 

3.样品离子浓度高 

4.拔完梳子后,加样孔有残留的胶,这样上样量就少了,因此建议,拔梳子后一定要用水把残留的胶冲净,但也要注意,水一定要吸干,否则和残留胶一样会导致同样的结果。 

5.拔梳子时不要左右摇动,避免破坏加样孔底部。 

6.上样要迅速,否则会引起样品扩散。 

7.上样与跑电泳之间的间隔太长,尽量缩短时间间隔。 

8.装配三明治结构要迅速。 

9.电泳的电压太高,发热导致扩散。 

10.降低一抗浓度。 

11.可以适当缩短曝光时间。 

12.10%APS现配现用,APS长期存放也会引起同样的问题。

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sswei

有帮助

wb时连成一条线可能有以下几种原因:

1)上样量过大 这里指的是质量数过大

2)曝光时间过长,同样会由此现象。


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