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现在大多数期刊要求整膜,但跑整膜效率太低,有什么方法可以提高效率吗?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dxy_dmvzen4


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3 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

浸泡PVDF膜5-10分钟,或者增加转膜时间,一定要注意散热,这很关键,冰融化了要及时更换。

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周末也要努力呀

有帮助

效率和完整性不可兼得。你可以孵育一抗完再洗脱后重新敷另外一个抗体,这已经是最快的了

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sswei

有帮助

可以考虑:转移缓冲液中加入20%甲醇(是指终浓度)(优化的转移缓冲液,可以参考《蛋白质技术手册》),因为甲醇可降低蛋白质洗脱效率,但可增加蛋白质和NC膜的结合能力,甲醇可以防止凝胶变形,甲醇对高分子量蛋白质可延长转移时间;转移缓冲液加入终浓度0.1%SDS ,也是为了增加转移效率;用优质的转移膜,或使用小孔径的NC膜(0.2微米);使用戊二醛交联;低浓度胶,如低至6 %。太大时还可以考虑用琼脂糖胶;提高转移电压/电流;增加转移时间。

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