请问，WB中一抗是如何取代封闭液的，一抗与二抗的结合又是通过怎么样进行的，是通过抗原决定簇与互补决定区吗？

利用一抗和二抗来检测目标蛋白质。一抗是指特异性结合目标蛋白质的抗体,二抗是指特异性结合一抗的抗体。通过这种方式,可以检测出目标蛋白质的存在和表达水平。

一抗把特异位点结合后就把位点封闭了，起到了封闭作用，一抗表面的位点又可以进一步结合二抗，实现特异性结合

封闭液是为了防止非特异性结合，而一抗可以把暴露的位点结合掉，也就间接取代了封闭液

WB实验中,一抗取代封闭液的原理是:

1. WB前需要先用封闭液(如5% BSA或脱脂奶粉)封闭膜,以阻止非特异性结合。

2. 加入一抗后,一抗与目标蛋白特异性结合,通过其Fab端的抗原识别位点(互补决定区CDR)识别目标蛋白的抗原确定簇(表位)。

3. 一抗的结合会占据膜上的所有目标抗原表位,阻止其他蛋白非特异性地结合在这些位点上。

4. 所以一抗取代了封闭液,通过特异性结合抗原实现了膜的特异性封闭。

二抗是识别一抗常量区(Fc)的二次抗体。一抗与二抗的结合不是通过抗原决定簇与互补决定区,而是:

1. 二抗是针对一抗所来源动物种属的IgG分子进行免疫获得的。

2. 二抗识别一抗Fc区高度保守的位点,这属于一种稳定的抗体-抗原结合。

3. 二抗上通常还结合了辅助检测的酶或者荧光物,用于成像。

所以一抗与二抗的结合是通过一抗Fc区与二抗Fab区的抗原-抗体反应实现的。