WB中单克隆抗体和多克隆抗体应该如何选择？有何区别？

选择使用单克隆抗体或多克隆抗体需要根据实验目的来决定:

1. 单克隆抗体

- 具有更高的特异性,只识别抗原上的单一表位。

- 识别性更强,背景较清晰。

- 更适合识别蛋白的不同修饰形式。

- 批次间效果一致性较好。

2. 多克隆抗体

- 识别抗原上的多个表位,不容易失活。

- 灵敏度高,通常可以检测到更低丰度的蛋白。

- 更适合检测总蛋白表达水平。

- 批次间效果差异大。

综合考虑目标蛋白的丰度、所需识别的特异性区域等因素,再选择单克隆抗体或多克隆抗体。初次检测时可先用多克隆抗体确定蛋白表达,后续可用单克隆抗体进行更精确的定量或功能识别。合理选择和配对抗体可以提高WB的效果。

单多抗优缺点

多克隆抗体

优点

1.多克隆抗体有助于放大低表达水平的靶蛋白信号；

2.能识别多个表位；

3.比单克隆抗体更能容许抗原中的微小变化；

4.识别出与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质，或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白；

5.多克隆抗体通常是检测变性蛋白质的首/选；

6.多表位通常可提供更为有力的检测。

缺点

1.易于产生批次间差异；

2.产生大量非特异性抗体，有时可能在某些应用中产生背景信号；

3.不适用于探测抗原的特定结构域，因为抗血清通常可识别多个结构域。

单克隆抗体

优点

1.杂交瘤制得后，就成为了恒定的再生源，所有批次都将相同；

2.切片和细胞染色造成的背景较低。

3.具有特异性，适于分析测定中的一抗或检测组织中的抗原，并且通常所产生的背景染色显著低。

4.同质性非常高；

5.单克隆抗体的特异性能使其在混合物中和抗原高效地结合。

缺点

1.可产生大量特异性抗体，但可能特异性过强；

2.经过抗原的化学处理后比多克隆抗体更易于丢失表位。这可通过使用同一抗原的两个或多个单克隆抗体进行补偿。

单抗和多抗的选择

如果对抗体的特异性要求高，用量较大或需要长期使用一致的抗体，制备的抗体应用要求多（WB/IP/IF/ICC等)，可以选择制备单克隆抗体。

多克隆抗体的特异性较差，即使是使用相同的抗原制备多抗，不同批次间也会存在差异，因而在特异性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫检测时，更容易造成背景，例如在WB 中有杂带，在IHC 中背景较深等等。虽然还存在着交叉反应的问题，但由于多抗识别多个抗原表位，即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变，实验的结果也不会受到影响。另外多抗需要免疫原的量大，如果免疫原制备困难，建议制备单抗。

若对抗体的特异性要求不高，需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做ELISA检测，可以选择制备多克隆抗体。

多抗相比较单抗仍然有制备时间短、首次制备成本低的特点，在一些情况下也是一种选择。另外，在相同条件下，使用多抗可以提高检测的灵敏度，对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。

单克隆抗体和多克隆抗体的最大的区别在于特异性上的差别。因此实验中如果对抗体的特异性有一定的需求，但并不是特别强调的话，可以选择定制多克隆抗体，这样的实验一般包含Western-Blot(WB)，IP等。如果您需要抗体用于流式细胞术时，那么最好选择单克隆抗体。

有条件的话推荐选择单克隆抗体，多克隆抗体可对应不同形式的目的蛋白，因此会出现多条带影响结果，单克隆则不会出现这种情况

首选单克隆抗体，非特异结合会比较少，不过可能会比较贵。

最好选择单克隆抗体，因为减少出现非特异性条带的出现。两者的区别在于前者由动物细胞产生，贵，单一抗原表位抗体；后者动物血清产生，便宜，属于多种抗原表位抗体