二抗anti-mouse可以代替anti-rat吗？

使用鼠源二抗代替大鼠源二抗进行Western blot或免疫荧光实验,原理上是可行的,但会有一定影响和需要注意的地方:

1. 特异性会降低。鼠二抗与大鼠一抗的亲和力和特异性不如对应的大鼠二抗,可能会出现杂交反应,导致背景升高和目标蛋白信号降低。

2. 灵敏度可能会降低。如果鼠二抗与大鼠一抗的亲和力较低,会导致目标蛋白的检测灵敏度降低。

3. 需要选择高交叉反应性的鼠二抗。一些商家会指出二抗与其他物种一抗的交叉反应性,应选择交叉反应性较高的鼠二抗。

4. 二抗浓度可能需要增加。由于亲和力降低,二抗的工作浓度可能需要相应增加,需要在实验中进行优化。

5. 检验二抗与大鼠抗体的交叉反应。如果有条件,最好进行Dot blot或Western blot测试,确认所选鼠二抗能够与所购买的大鼠一抗发生明显的交叉反应,并且表现出高信号强度和低背景。

一抗为鼠源抗体,二抗选择X-鼠(羊抗鼠,兔抗鼠)。

除了要与一抗的种属来源相一致,二抗还需与一抗的类别或亚类相匹配,对于多克隆抗体一般多是IgG类型,二抗可以选择X-鼠IgG(羊抗鼠IgG,兔抗鼠IgG)抗体。而单克隆抗体则相对复杂些,由于单克隆抗体有不同的类别和亚型,因此相应的二抗也需要根据这些亚型进行选择。否则会影响实验结果。

二抗anti-mouse不能代替anti-rat。代替了的话就做不出来。