非洲帝企鹅
abcam抗体,10%的胶,转膜300ma 60分钟,封闭过夜,一抗1:1000封闭过夜,二抗1:5000
汤姆卜丽波
你可以发一下你的条带,如果可以发出来光,只是条带不齐或者背景杂乱那就要适当调整封闭的时间,每次洗涤的时候充分洗涤
麻黄连翘赤小豆
可能是PVDF膜的问题,背景高的话显影时间会变长,大分子的话还是建议0.45mm的膜;也可能是封闭没封好,时间过长也容易造成背景高而导致显影时间变长
loveliufudan
对于大鼠脑组织的FTO(Fat mass and obesity-associated protein)蛋白检测,有几个方面可能需要注意和调整:
1. 抗体选择:确保使用的抗体对目标蛋白(FTO)有高度特异性和亲和力。使用经过验证的抗体可以提高实验结果的准确性。
2. 抗体稀释倍数:你提到的一抗和二抗的稀释倍数(1:1000和1:5000)可能需要优化。尝试不同稀释倍数,找到最适合的稀释倍数,以获得清晰的带和最低的背景信号。
3. 转膜条件:转膜条件(电流和时间)也可能需要调整。增加转膜电流或时间可能有助于提高转膜效率和信号强度。
4. 显影时间和显影剂浓度:超敏显影时间长(5分钟)和巨丑无比的结果可能与显影时间过长或显影剂浓度过高有关。尝试减少显影时间或减少显影剂浓度,以获得更好的结果。
此外,还有其他可能影响实验结果的因素,如蛋白提取和准备、实验室条件和操作技巧等。检查实验中可能存在的任何潜在问题,并进行适当的调整和优化,有助于改善实验结果。