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WB,PVDF膜显影呈磨砂,颗粒状

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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ihy杋

WB显影后PVDF膜就呈现这种完全一片白色,有蛋白的也有颗粒感,有人知道是怎么回事吗?

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3 个回答

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loveliufudan

有帮助

当在Western Blot显影后,PVDF膜呈现完全白色并具有颗粒感时,可能存在以下原因之一:

1. 过度曝光:过度曝光会导致所有区域的蛋白条带变得非常明亮,甚至超出线性范围。这可能会导致整个膜呈现一片白色。尝试减少显影时间或降低显影剂的浓度以避免过度曝光。

2. 背景信号过高:可能存在较高的非特异性背景信号。这可能是由于抗体结合不特异性的蛋白或试剂中存在的污染物引起的。确保使用高质量的抗体,并仔细优化实验条件和试剂配制过程,以降低背景信号。

3. 蛋白溶解度问题:某些蛋白可能在显影过程中聚集或沉淀,形成颗粒感。这可能是由于蛋白在显影缓冲液中的不适合溶解导致的。尝试使用适当的显影缓冲液和优化的条件,以确保蛋白的良好溶解性。

4. 空白控制问题:请确保进行了适当的空白对照实验,其中没有添加任何蛋白样品。如果空白对照显示相似的白色背景或颗粒感,那么问题可能出在试剂或操作上。


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sswei

有帮助

转膜效率低所致。转膜效率受多种因素影响,包括蛋白的大小、凝胶中丙烯酰胺的百分比、电场强度、转印时间和缓冲液的PH值。一般来说,蛋白越大,转移的越慢。转移大蛋白的方法是用高的电场强度。而小蛋白长时间处于高电场强度下可能会转出转印膜。避免这个问题的方法是用0.2μm孔径的PVDF膜进行转印。如果蛋白的等电点接近缓冲液的pH值,那么这个蛋白携带的电荷很少,在电场中也几乎不移动。如果目的蛋白是强碱性的,那么可以用碳酸盐(pH9.9)、CAPS(pH11)及酸性缓冲液。

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秋秋欣欣

有帮助

有可能是你的PVDF膜潮湿了。

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