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友友们dot blot求助

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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zzz0719

中间泛白怎么回事呢 染色总是很浅

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3 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

可能是过度曝光,调整一下曝光强度和曝光时间。

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于小鱼鱼1998

有帮助

泛白处可能是中心有污染,建议排除一下污染再做

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loveliufudan

有帮助

可能存在以下原因和解决方法:

1. 样品加载量过高:如果在Dot Blot中加载的样品过多,会导致在中间区域形成过多的蛋白斑点,导致泛白和染色浅。尝试减少加载的样品量,以确保每个点上的蛋白量适中。

2. 组分不均匀:在Dot Blot中,样品的均匀分布非常重要。确保样品在Dot Blot膜上的分布均匀,避免出现过于浓集或稀释的区域。使用适当的样品加载技术(例如,通过微量移液器均匀分布样品)可以帮助解决这个问题。

3. 缓冲液问题:选择合适的缓冲液和洗涤条件对于蛋白的定量和染色都非常重要。确保使用适当的缓冲液和洗涤缓冲液,以维持膜上的蛋白稳定和适当的结构。

4. 抗体或染色试剂问题:如果使用的抗体或染色试剂浓度过低,可能会导致染色结果较浅。检查抗体或染色试剂的浓度,并根据需要进行适当的优化。

5. 实验条件优化:Dot Blot是一种灵敏度较低的方法,因此需要仔细优化实验条件。调整孵育时间、温度、洗涤次数和强度等因素,以获得较好的染色结果。

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