CoIP实验中，怎么避免重轻链啊？

捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种，使用针对检测抗体物种的特异性二抗

如果目标蛋白分子量大于30Kda，为了避免抗体重链的干扰，使用轻链特异性的二抗。如果目标蛋白分子量小于30Kda，为了避免抗体轻链的干扰，使用重链特异性的二抗。

可以采取以下几个步骤：

1. 特异性抗体选择：选择用于共沉淀的抗体时，应该确保它具有高度的特异性，只与目标蛋白结合，而不结合其他非目标蛋白。

2. 交叉免疫沉淀控制：进行一个额外的对照实验，其中使用与目标抗体相同的物种来源的非特异性IgG（例如，正常兔IgG或正常鼠IgG）进行共沉淀。这将帮助确定沉淀中的重链和轻链是否是由于非特异性结合引起的。

3. 预清洗步骤：在COIP实验中，在进行共沉淀之前，可以对待测样品进行预清洗步骤。这可以帮助去除非特异性的结合物和杂质，从而减少重链和轻链的非特异性结合。

4. 交联剂的使用：在共沉淀实验中，可以考虑使用交联剂（例如，二甲亚砜）来固定蛋白质间的相互作用。这有助于稳定目标蛋白与其结合伴侣的复合物，减少轻链和重链的非特异性结合。

（1）捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种，使用针对检测抗体物种的特异性二抗；

（2）有条件的话，捕获抗体采用没有恒定区的纳米抗体。

捕获抗体同时被系脱下来，可能会出现抗体lgG重链（~55kD）和轻链（~25kD）与后续二抗发生交叉反应，这一情况也只出现在IP抗体与WB检测一抗相同种属的情况下。

解决方法一：用与IP抗体不同宿主的一抗

A蛋白抓捕抗体，A蛋白检测抗体种属不一样（IP）

A蛋白抓捕抗体，B蛋白检测抗体种属不一样（CoIP）

总结：CoIP实验购买针对A，B蛋白的抗体时，优先选购来自不同种属的抗体