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Wb显影膜全白有啥原因

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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甜美美大宝子

最近几次蛋白,样本都是新提的,之前能跑出来的分子,包括内参,现在显影是全白,一点条带都没有,连actin都是白的。然后借了别人有效的二抗,一抗我才配了用了两三次,所以没有新配,也没显出来。今天我试了转膜之后染丽春红,有的样本连丽春红染出来也是啥也没有;有的样本是有条带的。还把之前留着的没显出来也染了一下跟今天的丽春红染的一样的情况。今天又换了一抗。求wb大神指点一下,我真的好苦恼啊,一天叹了182口气了

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4 个回答

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申东熙老伯

有帮助

如果样品是新提没有储存错误,跑胶也没问题的话,应该就是一抗的问题,更换抗体再换一下孵育抗体的方式试一试。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

把样本重提,然后更换新的一抗和二抗,考虑还是试剂失效导致的结果全白

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feixue7758527w

有帮助

如果丽春红也没有,就是转膜的问题,具体还是要看看跑胶有没有条带,转膜后的情况,一般都是转膜的问题的。

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loveliufudan

有帮助

以下是可能导致问题的几个可能原因:

1. 样品处理问题:确保在提取蛋白质之前样品处理得当,如细胞裂解或组织破碎的过程。如果样品处理不充分,可能导致蛋白质无法得到充分释放或裂解。

2. 电泳和转膜问题:检查电泳条件是否正确,如电流和时间。确保样品均匀加载,电泳槽中没有泄漏,以及电泳缓冲液配制正确。此外,对于转膜步骤,确认转膜时间和电流是否适当,并确保膜与凝胶之间紧密接触。

3. 抗体问题:检查抗体的质量和有效性。如果使用的一抗或二抗存在问题,可能无法正确识别目标蛋白。确保抗体储存条件良好,并根据推荐的浓度和孵育时间进行实验。

4. 染色问题:确保染色剂的浓度和准备方法正确,以及染色的时间适当。如果染色剂浓度过高或染色时间过长,可能导致背景噪音过高,难以区分目标条带。

5. 蛋白质量问题:最近提取的样品可能存在质量问题,如降解、酶解或变性。确保在提取和处理样品时使用蛋白酶抑制剂,避免蛋白质降解。

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