尿素处理包涵体蛋白

对于包涵体中的蛋白质，通常需要用尿素进行处理以帮助其在电泳过程中展开成线性构象，从而更容易被分离和检测。下面是一般的尿素处理协议，供参考：

材料：

包涵体样品

蛋白质电泳缓冲液（含有适量的尿素）

1 M Tris-HCl pH 8.0

1 M DTT

1 M IAA（碘乙酸）

蒸馏水

步骤：

在室温下取出包涵体样品，加入足量的蛋白质电泳缓冲液，并混合均匀。

将样品加入1 M DTT（终浓度一般为10 mM），使其还原内源性二硫键。可以将样品在37°C下孵育30分钟以加速还原反应。

加入1 M IAA（终浓度一般为30 mM），使还原的半胱氨酸残基形成酰基。此步骤应在暗处进行，以避免IAA的光敏性。

加入1 M Tris-HCl pH 8.0（终浓度一般为50 mM），调节样品的pH值，使其接近中性。

加入适量的蛋白质电泳缓冲液，使样品中的尿素浓度达到所需的浓度（一般为4-8 M）。可以根据不同的蛋白质性质和目的来选择适当的尿素浓度。

将样品混合均匀，并在室温下孵育至少1小时，以帮助蛋白质在尿素的作用下展开成线性构象。

如果需要将样品进行电泳，可以将其直接加载到凝胶中。如果需要进行其他进一步的处理，比如亲和层析或染色，可以根据实验需要进行相应的步骤。

1收菌破碎

细菌发酵液高速离心收集菌体，经超声破碎或者裂解液处理后，高速离心收集沉淀。

2洗涤

用低浓度的变性剂如2 M尿素在50 mM Tris ，pH 7.5条件下洗涤包涵体，除去包涵体上粘附的杂质，此外可以用温和去垢剂TritonX-100洗涤去除膜碎片和膜蛋白。

3变性溶解

一般用强的变性剂如尿素通过离子间的相互作用，打断包涵体蛋白分子内和分子间的各种化学键，使多肽伸展。

4.后续实验

得到的溶解液可以进行后续实验

把包涵体，用TRIS缓冲液洗干净了，直接加入6M的尿素溶解即可