【WB求助】蛋白跑到一半下不来

clarasun

2023-04-27

大概就是图示这样。一开始能跑开，然后跑到某一个水平的时候就像卡住了似的，蛋白不再往下跑了，上边的蛋白也会掉下来，都卡在这一条线上。转膜后蛋白条带都散了，没有集中在它的预期大小位置上。

参数：10%sds，电泳液买的现成的粉末，配制后ph8.6-8.8，分离胶恒压200v，电流初始约40mA，结束时15-20mA。aps是现配的。电泳体系偶尔会发烫。整个过程中未发现漏胶漏液。

求大佬指点可能是什么情况🥹

loveliufudan

2023-04-27

有帮助

可能存在以下几个问题及对应的解决办法：

1.蛋白质条带卡在某一个水平，无法继续迁移：这可能是由于电泳缓冲液的pH值过高或过低导致的。您可以尝试调整pH值到6.8-7.8之间，看看是否有所改善。此外，电泳温度过高也可能导致此问题，您可以降低电流或将电泳槽放在冰上进行电泳以降低温度。

2.蛋白质条带分离不良：这可能是由于电泳缓冲液中离子浓度过高或者不均匀导致的。您可以尝试调整离子浓度或者尝试新鲜制备电泳缓冲液以获得更好的效果。另外，您也可以考虑使用其他的电泳缓冲液或者分离胶试试看。

3.电泳体系偶尔发烫：这可能是由于电流过高或者电泳时间过长导致的。您可以尝试降低电流或者缩短电泳时间，以避免过度发热损坏电泳体系。